1980'lerin sonunda, modellik ve oyunculuk kariyeri için Chicago'ya giden Berry, Chicago Force adli televizyon dizisinde oynamaya basladi. Ünlü televizyon yapimcisi Aeron Speeling, o dönemde çekilmesi düsünülen Charlie's Angels dizisinin yeni versiyonunda Afrika asilli bir Amerikalinin oynamasini istiyordu ve Berry de dizinin seçmelerine katildi. Dizinin asla yayina girmemesi yüzünden bu rolde oynayamadi ama Berry'i oldukça begenen Spelling, O'nu yeteneklerini gelistirmesi konusunda yüreklendirdi.
1989'da kisa süren ABC yapimi Living Dolls dizisinde Emily Franklin rolünü canlandirmaya basladi.Berry'nin ilk kez göze çarpmasini saglayan rol ise Spike Lee'nin Jungle Fever adli filmindeki, uyusturucu bagimlisi Vivian adindaki bir kadini canlandirdigi rolü oldu. Ilk yardimci oyuncu rolünü, Strictly Business filminde yakalayan Berry, 1996'da Sandra Beecher'in gerçek hayat hikayesinin anlatildigi,Race the Sun adli filmde bas rolü oynadi. Ayni yil Queen: The Story of an American Family'nin televizyon versiyonunda canlandirdigi, melez köle rolüyle de seyircinin fazlasiyla dikkatini çekti.
2000 yilinda çizgi roman X-men'in film uyarlamasinda, Storm'u canlandirarak dünya çapinda taninmaya basladi ve devam filmleri X2: X-Men United ve X-Men: The Last Stand'de de yeraldi. 2001'in sonunda Monster's Ball adli filmde Leticia Musgrove adinda idam edilmis bir katilin karisini canlandirdi ve bu rolle En Iyi Kadin Oyuncu dalinda Oskar Ödülü'nü kazandi. Bu ödülü kazanan, ilk Afrika asilli oyuncu olan Berry'nin ödül töreninde giydigi kiyafet, son 75 yilin en popüler kiyafeti seçildi.
2002 yapimi Bond filmi, Die Another Day'de Bond Kizi Jinx'i oynayan Berry, bu filmde kirk yil önceki James Bond filmi Dr.No'daki Ursula Andress'in rolünü yeniden canlandirdi. 2003'ün sonlarinda psikolojik gerilim filmi Gothika'da yer aldi ve ilk kez bir filmde en önemli rolü oynamis oldu. Ardindan Catwoman'da bas rolü alan Berry'nin burdaki performansi begenilmedi ve 2005 yilinda Razzie Awards'da En Kötü Kadin Oyuncu ödülü ona verildi. Ünlü oyuncu bu durum için ‘En tepede olmak için dibi görmek gerek.' yorumunu yapti. Kamera arkasina da geçmeyi isteyen aktris, roman yazari Angela Nissel'le, yazarin The Broke Diaries ve Mixed: My Life in Black and White adli iki eserinin, dizi haline getirilmesi için birlikte çalismaya basladi. Yillarca Revlon'un yüz mankenligini yapan Berry, Versace'nin de yeni yüzü olarak açiklandi. Dünyanin en seksi kadinlari arasinda sikça ismi anilan yildiz, Gothika ve Catwomanfilmlerinin herbiri için aldigi 14 milyon dolarlik ücretlerle de Hollywood'un en pahali aktrislerinden biri ve en çok kazanan siyahi kadin oyuncu.